Talinumpaniculatum: a plant with antifungal potential mitigates fluconazole-induced oxidative damage-mediated growth inhibition of Candida albicans / Talinum paniculatum: una planta con potencial antifúngico atenúa la inhibición del crecimiento de Candida albicans mediada por el daño oxidativo inducido por fluconazol

SUMMARY Aims: This study investigated the bioactivity of the crude leaf extract (CLE) and fractions hexane (HX) and ethyl acetate (EtOAc) from Talinum paniculatum alone and in association with fluconazole (FLC) against reference strain and clinical isolates of FLC-resistant Candida albicans. Furthermore, the antioxidant capability, chemical composition of this plant, and the effect's underlying mechanisms were evaluated. Methods: The antifungal activity was evaluated using checkerboard assay to establish the minimum inhibitory (MIC) and minimum microbicidal concen trations (MMC). During FLC and plant products challenges, the reactive oxygen species (ROS) generation (hydroxyl radicals [HO●]) were detected in C. albicans cells using the membrane-permeable fluorescent probes APF and HPF. High-performance liquid chromatography (HPLC) profile, quantitative analysis of antioxidant compounds, and free radical scavenging activity (DPPH assay) tests were performed. Results: The CLE and fractions presented outstanding antifungal activity and selectivity against C. albicans cells but had no synergistic effect's with FLC. The MIC values for CLE and its fractions against C. albicans reference strain were in the order of HX (31.25 µg ml-1) < EtOAc (62.5 μg ml-1) < CLE (500 μg ml-1), and against FLC-resistant C. albicans HX (125 μg ml-1) = EtOAc < CLE (500 μg ml-1). CLE and its fractions had more potent antifungal activities than FLC against the clinical isolates. Moreover, fungicidal effect's for these plant products were demonstrated against FLC-resistant C. albicans, which further conirmed an antifungal potential. Conversely, during association, plant products were shown to cause an increase in FLC MIC anywhere from 2- to 16-fold. FLC exposure led to an increase in the steady-state levels of ROS (HO●) in C. albicans cells. Next, we found that the increases in FLC MICs were owing to action of antioxidants containing-CLE and its fractions in preventing FLC-induced ROS-mediated growth inhibition of C. albicans. Conclusion: T. paniculatum can be a source of bioactive compounds with antifungal potential. However, because of the common use of its edible leaf, caution is advised during therapy with FLC (since it can decrease FLC susceptibility).

RESUMEN Objetivos: este estudio investigó la bioactividad del extracto de hoja en bruto (EHB) y las fracciones hexano (HX) y acetato de etilo (AcOEt) de Talinum paniculatum solo y en asociación con fluconazol (FLC) contra cepas de referencia y aislados clínicos de Candida albicans resistente a FLC. Además, evaluó la capacidad antioxidante, la composición química de esta planta y los mecanismos subyacentes del efecto fungicida. Métodos: la actividad antifúngica se evaluó mediante microdilución en caldo para establecer las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) y microbicidas mínimas (CMM). Durante el tratamiento con FLC y productos vegetales se detectó la generación de especies reactivas de oxígeno (ERO) (radicales hidroxilo [HO●]) en células de C. albicans utilizando las sondas fluorescentes permeables a la membrana APF y HPF. El perfil de cromatografía líquida de alta resolución (CLAR), el análisis cuantitativo de compuestos antioxidantes y el ensayo DPPH fueron evaluados. Resultados: el EHB y las fracciones presentaron una excelente actividad antifúngica y selectividad contra las células de C. albicans, pero no tuvieron efectos sinérgicos con FLC. Los valores de CIM para EHB y sus fracciones contra la cepa referencia de C. albicans fueron del orden de: HX (31,25 μg ml-1) < AcOEt (62,5 μg ml-1) < EHB (500 μg ml-1), y contra C. albicans resistente a FLC: HX (125 μg ml-1)= AcOEt < EHB (500 µg ml-1). EHB y sus fracciones fueron más potentes antifúngicos que FLC contra los aislados clínicos. Además, estos productos vegetales tienen efectos fungicidas contra C. albicans resistentes a FLC, esto conirmó el potencial antifúngico. Por el contrario, durante la asociación se demostró que los productos vegetales causan un aumento en la CIM de FLC de 2 a 16 veces. La exposición a FLC aumentó los niveles de ERO (HO●) en las células de C. albicans. Los aumentos en las CIM de FLC se debieron a la acción de los antioxidantes presentes en EHB y sus fracciones para prevenir la inhibición del crecimiento mediada por ERO inducida por FLC en C. albicans. Conclusión: T. paniculatum puede ser una fuente de compuestos bioactivos con potencial antifúngico. Sin embargo, debido al uso común de su hoja comestible, se recomienda usarla con precaución durante la terapia con FLC (ya que puede disminuir la susceptibilidad a FLC).

Talinum paniculatum leaves with in vitro antimicrobial activity against reference and clinical strains of Staphylococcus aureus interfere with oxacillin action / Las hojas de Talinum paniculatum con actividad antimicrobiana in vitro contra cepas de referencia y clínicas de Staphylococcus aureus interfieren con la acción de la oxacilina

SUMMARY Propose: We evaluated the antibacterial potential of the crude leaf extract (CLE) and fractions hexane (HX) and ethyl acetate (EtOAc) from Talinum paniculatum alone and in association with oxacillin (OXA) against OXA-resistant Staphylococcus aureus (ORSA, environment isolates) and OXA-sensitive S. aureus (OSSA, ATCC 25923). Furthermore, toxicity tests were performed. Methods: The antibacterial activity was evaluated through checkerboard assay (broth microdilution) to establish the minimum inhibitory (MIC) and minimum bactericidal concentrations (MBC). Toxicity test in mice was assessed. Results: The MIC values for the CLE and its fractions against ORSA and OSSA were in the order of HX (500 μg ml-1) = EtOAc < CLE (4000 μg ml-1). EtOAc and HX presented outstanding antibacterial activities against ORSA, and these fractions were bactericidal toward OSSA. Conversely, the associations between plant product (CLE, EtOAc, or HX) and OXA exhibited no synergistic effects. During these associations, there was an increase in OXA MICs anywhere from 2- to 4092-fold. The CLE presented absence of toxicity at a dose of 5 g kg-1 (in vivo). Conclusion: Although T. paniculatum be a good source of bioactive compounds with antistaphylococcal potential, the researchers should be cautious, since its edible leaf may interfere with OXA therapy (mitigating OXA-induced growth inhibition or killing of S. aureus and enhancing S. aureus resistance).

RESUMEN Propósito: evaluamos el potencial antibacteriano del extracto de hoja en bruto (EHB) y las fracciones hexano (HX) y acetato de etilo (AcOEt) de Talinum paniculatum solo y en asociación con oxacilina (OXA) contra Staphylococcus aureus resistente a OXA (ORSA, ambientales) y S. aureus sensible a OXA (OSSA, ATCC 25923). Además, se realizaron pruebas de toxicidad. Métodos: la actividad antibacteriana se evaluó mediante microdilución en caldo para establecer las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) y bactericidas mínimas (CBM). Se evaluó la toxicidad en ratones. Resultados: los valores de CIM para el EHB y sus fracciones contra ORSA y OSSA fueron del orden de HX (500 μg ml-1) = AcOEt < EHB (4000 μg ml-1). AcOEt y HX presentaron actividades antibacterianas sobresalientes contra ORSA, y estas fracciones fueron bactericidas hacia OSSA. Por el contrario, las asociaciones entre el producto vegetal (EHB, AcOEt o HX) y OXA no mostraron efectos sinérgicos. Durante estas asociaciones, hubo un aumento en las CIM de OXA de 2 a 4092 veces. EHB no mostró toxicidad a una dosis de 5 g kg-1. Conclusión: aunque T. paniculatum es una buena fuente de compuestos bioactivos con potencial antiestofilocócico, los investigadores deben ser cautelosos, ya que su hoja comestible puede interferir con la terapia con OXA (mitigando la inhibición del crecimiento inducida por OXA o la muerte de S. aureus y promoviendo resistencia bacteriana).